蛋白A（Protein A） 殘留檢測試劑盒
- 別名：殘留蛋白A檢測試劑盒 Protein A ELISA kit 蛋白A（Protein A） 殘留檢測試劑盒
- 編碼：DDM1416A
- 級別：
- 簡介：抗體類藥物生產時多用到的蛋白A（Protein A）親和層析填料，不可避免會有蛋白A配基脫落，導致抗體藥物中蛋白A的殘留污染。本試劑盒既可檢測天然的protein A，也可檢測重組的protein A如MabSelect SuRe等，適用于定量分析生物藥物中蛋白A雜質。
基礎信息
| 靈敏度 | LOD 10pg/ml, LOQ 10pg/ml |
| 線性 | 在[10-3000]pg/mL的測量范圍內，r≥0.9900 |
| 回收率 | 80%-120% |
| 批間差 | ≤10% |
| 特異性 | 既可檢測天然的protein A,也可檢測重組的protein A |
| 應用 | 適用于定量分析生物藥物中蛋白A雜質 |
產品介紹
簡介
抗體類藥物生產時多用到的蛋白A（Protein A）親和層析填料，不可避免會有蛋白A配基脫落，導致抗體藥物中蛋白A的殘留污染。本試劑盒既可檢測天然的protein A，也可檢測重組的protein A如MabSelect SuRe等，適用于定量分析生物藥物中蛋白A雜質。
優勢
通常情況下，蛋白A會與待測樣品中的單克隆抗體形成復合體從而影響準確的蛋白A測定，與傳統方法相比，本試劑盒無需樣品預處理步驟，即可檢測從IgG中分離的蛋白A，實驗簡單易操作，且耗時短。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心酶聯免疫檢測技術測定樣品中proteinA的含量。包括校準品，標準品，稀釋液，
Biotin標記的檢測抗體，清洗液，雙組分TMB顯色液，終止液，預包被酶標板，封板膜。
使用方法
試劑準備
1.本試劑對水份敏感，在開瓶前，需將各組分小瓶平衡至室溫，以避免容器內的水份冷凝。
2.清洗液的配制：用蒸餾水或純化水10倍(1:9)稀釋試劑E 清洗液(10X),配制實驗用清洗液。長期使用可放于2℃~8℃保存，效期3個月。
3.設置酶標儀，讀取波長450nm/630nm的雙波長。
4.顯色液的配制：雙組份TMB顯色液由兩部分組成：組分A(含H2O2)和組分B(含TMB),分瓶包裝，臨用前按1:1混合后使用。
5.校準品的配制：檢測含有天然或重組Protein A樣品時，請參照下表稀釋步驟配制出標準曲線：3000.00pg/mL、1500.00pg/mL、800.00pg/mL、320.00pg/mL、128.00pg/mL、51.20pg/mL 、20.48pg/mL、0.00pg/mL。
校準品名稱 | 移取 | 加入至 | 配成重組Protein A濃度 |
濃溶液 | 10μL的3μg/mL試劑A校準品 | 990μL的試劑B稀釋液，混勻 | 30ng/mL |
校準品H | 40μL的30ng/mL校準品 | 360μL的試劑B稀釋液，混勻 | 3000.00pg/mL |
校準品G | 200μL的校準品H | 200μL的試劑B稀釋液，混勻 | 1500.00pg/mL |
校準品F | 200μL的校準品G | 175μL的試劑B稀釋液，混勻 | 800.00pg/mL |
校準品E | 150μL的校準品F | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 320.00pg/mL |
校準品D | 150μL的校準品E | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 128.00pg/mL |
校準品C | 150μL的校準品D | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 51.20pg/mL |
校準品B | 150μL的校準品C | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 20.48pg/mL |
校準品A | 150μL的試劑B稀釋液 | 0.00pg/mL |
6.樣品的配制：
通常情況下，Protein A會與待測樣品中的抗體形成復合體，而高濃度IgG會影響檢測結果，從而影響Protein A的準確測定。因此在測定Protein A之前應當進行樣品稀釋。推薦用試劑B稀釋液，將樣品稀釋至0.1-1.0mg/mL的蛋白濃度，可嘗試將樣品10-50倍稀釋，或稀釋至檢測線性范圍的濃度進行檢測，稀釋完的樣品體積應不少于150μL。
未提供的必需品
1.具有450nm和630nm雙波長檢測功能的酶標儀。 (如果酶標儀不能提供雙波長分析，也可以僅在450nm波長下讀取)。
2.移液器5-200μLg
3.多通道移液器100μL。
4.蒸餾水或純化水。
5.用于稀釋清洗液的500mL容器。
檢測操作步驟
1.取所需數量的組份H預包被酶標板條固定于板架上；向孔中加入校準品/待測樣品，每孔50μL,每個濃度兩個重復；
2.輕輕震蕩混勻，貼上組份I封板膜，20-25℃振蕩(500rpm)孵育60分鐘；
3.洗板：甩凈孔中液體，在各反應孔中加入稀釋后的實驗用清洗液(由試劑E清洗液稀釋后配制),每孔300μL,停留5秒鐘后甩去孔中液體，重復3次，最后一次甩凈拍干。機洗：每孔中注液量為每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
4.加入試劑C Biotin標記的檢測抗體，每孔100μL；
5.輕輕震蕩混勻，貼上組份I封板膜，20-25℃振蕩(500rpm)孵育60分鐘；
6.洗板：甩凈孔中液體，在各反應孔中加入稀釋后的實驗用清洗液(由試劑E清洗液稀釋后配制),每孔300μL,停留5秒鐘后甩去孔中液體，重復3次，最后一次甩凈拍干。機洗：每孔中注液量為每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
7.加入試劑D鏈霉親和素-辣根過氧化物酶復合物，每孔100μL；
8.輕輕震蕩混勻，貼上組份I封板膜，20-25℃振蕩(500rpm)孵育30分鐘；
9.洗板：甩凈孔中液體，在各反應孔中加入稀釋后的實驗用清洗液(由試劑E清洗液稀釋后配制)每孔300μL,停留5秒鐘后甩去孔中液體，重復3次，最后一次甩凈拍干。機洗：每孔中注液量為每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
10.顯色：加入試劑F顯色液，每孔100μL,20-25℃,避光孵育8分鐘；
11.終止：加入試劑G終止液，每孔100μL,終止反應(此時藍色立刻轉為黃色);
12.測定：用酶標儀在450nm/630nm雙波長下，讀取各孔的吸光值(O.D.值),如果酶標儀不提供雙波長分析，可以僅在450nm波長下讀取，測定應在加入終止液后15分鐘以內進行。
結果分析與計算
1.校準品、待測樣品均做2個重復，取其平均值。
2.用酶標儀的自帶軟件(通常是四參數邏輯曲線擬合)或使用能夠生成四參數邏輯擬合(log-4PL)的計算機軟件制作校準品劑量-反應曲線的回歸方程，再根據待測樣品的O.D.值從回歸曲線上返算出樣品中待測物的濃度。
3.請勿使用線性回歸分析來推導樣品濃度，避免導致結果不準。
4.含有大于3000pg/mL的Protein A樣品需用所提供的試劑B稀釋液稀釋后測定。計算結果時，需將稀釋后的樣品濃度乘以稀釋倍數。
質量指標
MSDS
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