膽固醇硫酸酯是人類精子的天然成分，在精子的成熟過程中起著重要角色。它也可能參與精子的獲能并使卵子穿透。低濃度的硫酸膽固醇可抑制頂體酶，頂體酶是精子頂體中的一種蛋白酶，可促進卵子穿透。膽固醇硫酸鈉在 10 mg/mL 氯仿-甲醇 (1:1) 混合液中生成澄清、無色溶液。利用膽甾醇硫酸鈉作為膽固醇的來源制備埃德加試劑的生長培養基，用于胚胎學實驗。以其作為薄層色譜法分離人體角質層脂質的標準品。