DNase I是一種內切核酸酶，可作用于與嘧啶相鄰的磷酸二酯鍵以產生具有末端5′-磷酸的聚核苷酸。

DNAse I可用于切開DNA，作為將標記堿基插入DNA的步驟。

脫氧核糖核酸酶I已用于研究枯草芽孢桿菌中核酸酶的二維酶譜分析。來自牛胰腺的脫氧核糖核酸酶I還用于研究小溝和大溝結合藥物和嵌入劑對小溝結合蛋白RecA和脫氧核糖核酸酶I的DNA結合的影響。
用于從蛋白質樣品中除去 DNA。