【基本信息用途】

本產品是使用Seebio?  Reverse Transcriptase，以總RNA或m RNA為模板合成1st Strand cDNA的試劑盒，含有所需的全部試劑。Seebio?  Reverse Transcriptase，是一種大腸桿菌重組表達的改進型鼠白血病逆轉錄酶，具有高溫反應、優越的持續合成能力和強的雜質耐受能力，逆轉錄溫度可提高至50~55℃，避免RNA復雜二級結構對cDNA合成的抑制。可提供更高的全長cDNA產量。合成的1st Strand cDNA可廣泛應用于第二鏈合成、雜交、PCR、qPCR 反應等。

【試劑盒組成】

【特點和優勢】

(1)逆轉錄效率高、產量優異：Seebio? Reverse Transcriptase缺失了RNA酶H活性，具有更強的延伸能力和穩定性，具有更好的逆轉錄效率，可提供較普通逆轉錄酶更高的全長cDNA產量；
(2)耐熱性及穩定性強：逆轉錄酶耐受高溫的能力是cDNA合成的重要影響因素，Seebio? Reverse Transcriptase在50-55℃下具有更高的熱穩定性和更長的半衰期；
(3)雜質耐受度強：對常見雜質（乙醇、異丙醇、水平衡酚、異硫氰酸胍、腐殖酸）均具有強的耐受度。

【用途】

以mRNA或者總RNA為模板，合成第一鏈cDNA：

1、RNA的逆轉錄，cDNA的克隆、基因表達

2、設備制造商配套檢測用試劑，如數字PCR儀、熒光定量PCR儀

【使用建議】

1.需準備的主要試劑和儀器
恒溫水浴鍋、瓊脂糖凝膠、電泳儀、離心機、移液器和槍頭等。注意操作過程應RNase-Free。

2.1st strand cDNA 合成反應
(1)按下表配制反應液

(2)緩慢混勻后，進行逆轉錄反應：30℃10 min， 50℃30-60 min。

(3)反應結束后，95℃保溫5 min使酶失活，-20℃保存。長片段cDNA合成時，70℃ 15 min失活處理可保障片段有更好的完整性。