5'-核苷酸酶(5'-NT)是一種對底物特異性不高的水解酶，可作用于多種核苷酸。此酶主要來源于肝臟，廣泛存在于人體組織，如肝、膽、腸、腦、心、胰等。5'-NT測定主要是比色法，操作麻煩，難以自動化，但試劑易得，適用于基層單位應用。

血清中5'-NT測定主要用于肝膽系統疾病的診斷和骨骼疾病的鑒別診斷。