DNase I是一種內切核酸酶，可作用于與嘧啶相鄰的磷酸二酯鍵以產生具有末端5′-磷酸的聚核苷酸。當Mg2+存在時，DNAse I可獨立切割DNA的每條鏈且切割位點是隨機的。當Mn2+存在時，兩條DNA鏈都幾乎是在同樣的位置被切割。二價陽離子如Mn2+, Ca2+, Co2+以及Zn2+都是酶的激活劑。5 mM濃度的Ca2+可穩定酶免收蛋白水解酶的消化。適合pH在7-8之間。來自牛胰腺的DNAse I由四種色譜可區分的組分A，B，C和D組成，它們的摩爾比分別為4:1:1。僅發現少量D。2-巰基乙醇、螯合劑、十二烷基硫酸鈉（SDS）和肌動蛋白都已知可抑制酶的活性。

應用
從原代細胞分離液中去除DNA，在降低粘度的同時提高產量：
將標記堿基摻入DNA：DNA缺口
放射性標記

生物工藝應用：
DNA去除
在RT-PCR前從RNA制劑中去除基因組DNA體外轉錄
缺口平移
DNase足跡
肌動蛋白調控胞內肌動蛋白聚合和細胞凋亡
蛋白質與核酸紫外線交聯

DNase參與調控胞內肌動蛋白聚合，同時參與細胞凋亡過程。
用于從蛋白質樣品中除去 DNA。