背景
用作生物藥物的治療性抗體結構復雜，異質性高，在制造過程中需要嚴格監管和控制。抗體分子大小異質性是抗體的生產工藝優化、生產過程控制及放行分析中重要質控指標之一。為了確保單克隆抗體及其他生物分子藥物的安全性和有效性，需要對這些藥物進行全面深入的表征分析。
隨著獲批的抗體藥物數量逐年急劇增加，例如mAb、Fc融合蛋白、Fab、ADC、雙特異性抗體和雙特異性T細胞接合劑(BiTE)，了解單個翻譯后修飾(PTM)可以更好地分析和預測治療性抗體的體內功效、藥代動力學和作用機制。
治療性抗體、融合蛋白等的表征通常從三個水平進行，包括自上而下的完整分子量水平、自下而上的多肽水平、亞基水平。常用作治療性蛋白理化分析的工具酶有PNGase F酶、IdeS酶、Papain、GinsKHAN、GlySERIAS酶、肽圖分析用的胰蛋白酶Trypsin、GluC、LysC、糜蛋白酶Chymotrypsin等。
Seebio可提供一系抗體/蛋白理化分析工具酶，用于協助單克隆抗體、融合蛋白藥物、生物類似藥等生物藥的表征分析及其相關翻譯后修飾，助力生物藥物的開發和質量控制。
蛋白測序肽圖分析
蛋白酶 | 酶切位點 | 特點 |
重組胰蛋白酶（質譜級） | 賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端 | 胰蛋白酶β型占比>80%； 比活≥6200 USP U/mg（相當于18600 BAEE U/mg） 強穩定性，凍融次數可達10次； 和進口品牌比，肽段漏切率更低、蛋白鑒定數更高； 批間差穩定，可提供相關法規支持文件。 |
重組賴氨酰內切酶(Lys-C) | 賴氨酸羧基側的酰胺、酯和肽鍵 | 可單獨使用，也可與胰蛋白酶聯用，鑒定更多的蛋白數以及磷酸化位點數目； 在4M尿素或者0.1%SDS存在的情況下仍可保持較高的酶活性。 |
Glu-C蛋白酶 | 谷氨酸或天冬氨酸殘基羧基端肽鍵 | 對于分析賴氨酸和精氨酸含量高的蛋白質，與胰蛋白酶聯用可顯著提高鑒定蛋白數目； 適用于分離和富集磷酸化肽段； |
重組人α-糜蛋白酶 | 酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸的羧基端肽鍵 | 特別適用于膜蛋白分析。 |
糖基化分析工具酶
糖苷酶 | 名稱 | 酶切位點 | 特點 |
唾液酸修飾 | 唾液酸酶(a2-3,6,8) | 糖蛋白和寡聚糖上通過a2-3,a2-6,a2-8鍵連接的唾液酸 | 可同時作用于N-羥乙酰神經氨酸和N-乙酰神經氨酸。 |
唾液酸酶(a2-3,6,8,9) | 糖蛋白和寡聚糖上通過a2-3,a2-6,a2-8和a2-9鍵連接的唾液酸 | 可同時作用于N-羥乙酰神經氨酸和N-乙酰神經氨酸； 可以忍受0.5%-1.0%的去污劑。 | |
N-糖基化修飾 | PNGase F | 天冬酰胺和最內側的GIcNAc之間的糖苷鍵 | 適用于抗體和糖蛋白的N-糖基完全去除； 可在變性與非變性條件下切割糖蛋白。 |
重組Endo H | N-糖蛋白中的高甘露糖和某些雜合型寡聚糖的殼二糖核心結構 | 適用于抗體或者其它糖蛋白的N-連接高甘露糖的完全去除。 存儲液中不含甘油。 | |
O-糖基化修飾 | O糖蛋白酶 | 粘蛋白型O-連接糖(無論是否唾液酸化)的絲氨酸或蘇氨酸殘基 | 適用于O-糖基化分析； 無需唾液酸酶預先處理。 |
抗體切割酶
IdeS Protease和IdeZ Protease是分別來源于化膿性鏈球菌 (Streptococcus pyogenes)和馬鏈球菌獸瘟亞種 (Streptococcus equi)的重組蛋白酶，該蛋白酶具有極高的底物特異性，能識別人等特定物種和特定類型的IgG，并在抗體鉸鏈區下方的特定位點進行酶切，使IgG水解為完整的F(ab')2片段和Fc片段。IdeS/Z酶作為工具酶應用于抗體類藥物的制備和結構表征分析，是用于表征治療性抗體、單克隆抗體、抗體偶聯藥物、Fc融合蛋白和抗體-藥物復合物的有價值的工具。
名稱 | 酶切位點 | 特點 |
IdeS蛋白酶 | 特異識別IgG,并在IgG下鉸鏈區的特定位點 | 可將lgG水解為完整的F(ab')2片段和Fc片段。 |
IdeZ蛋白酶 | 特異識別IgG,并在IgG下鉸鏈區的特定位點 | 可同時作用于N-羥乙酰神經氨酸和N-乙酰神經氨酸； 可以忍受0.5%-1.0%的去污劑。 |
標簽切除工具酶
名稱 | 酶切位點 | 特點 |
重組TEV蛋白酶（rTEV Protease） | 嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。 | 一種用來切除融合蛋白上標簽序列的常用工具酶，較EK、SUMO等蛋白酶的位點專一性更強，具有高活性和高特異性的特點。 |
Seebio蛋白工具酶匯總
蛋白測序肽圖分析 | ||
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
DCE0060U | 重組胰蛋白酶（質譜級，液體） | 25ug 100ug |
DCE0060T | 重組胰蛋白酶（質譜級，凍干） | 25ug 100ug |
EXK0369B | 重組賴氨酰內切酶 | 20ug |
AXJ4266C | 重組Glu-C蛋白酶，凍干 | 25ug 100ug |
AXJ4266B | 重組Glu-C蛋白酶 | 20ug 100ug |
DCL0640B | 重組人α-糜蛋白酶（凍干） | 20ug 50ug 100ug |
糖基化酶 | ||
>ECE0441E | PNGase F重組糖苷酶 | 20KU 40KU |
DCE0447C | 重組Endo H | 3KU 15KU |
DCE0448B | O糖蛋白酶 | 20U 100U |
DCE0457F | 唾液酸酶(α2-3,6,8) | 500U 2KU 10KU |
DCE0457E | 唾液酸酶(α2-3,6,8,9） | 2KU 10KU |
抗體切割酶 | ||
ECE0711A | IdeS蛋白酶 | 700U |
ECE0712A | IdeZ蛋白酶 | 1KU 2KU |
標簽切除工具酶 | ||
EBY3644A | Seebio?重組煙草蝕紋病毒蛋白酶（rTEV Protease） | 1KU 5KU 10KU |
相關產品
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
ACH0011F | 鹽酸胍 | 1kg |
DCH0005D | 二硫蘇糖醇（DTT） | 5g，100g，250g，500g |
AAU0091A | 碘乙酸 | 1g，5g |
ACC0030 | 三羥甲基氨基甲烷<結晶>(Tris base) | 100g，500g，1kg，25kg |
ACC0029 | 三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(TRIS-HCl) | 250g，500g，1kg，25kg |
背景
用作生物藥物的治療性抗體結構復雜，異質性高，在制造過程中需要嚴格監管和控制。抗體分子大小異質性是抗體的生產工藝優化、生產過程控制及放行分析中重要質控指標之一。為了確保單克隆抗體及其他生物分子藥物的安全性和有效性，需要對這些藥物進行全面深入的表征分析。
隨著獲批的抗體藥物數量逐年急劇增加，例如mAb、Fc融合蛋白、Fab、ADC、雙特異性抗體和雙特異性T細胞接合劑(BiTE)，了解單個翻譯后修飾(PTM)可以更好地分析和預測治療性抗體的體內功效、藥代動力學和作用機制。
治療性抗體、融合蛋白等的表征通常從三個水平進行，包括自上而下的完整分子量水平、自下而上的多肽水平、亞基水平。常用作治療性蛋白理化分析的工具酶有PNGase F酶、IdeS酶、Papain、GinsKHAN、GlySERIAS酶、肽圖分析用的胰蛋白酶Trypsin、GluC、LysC、糜蛋白酶Chymotrypsin等。
Seebio可提供一系抗體/蛋白理化分析工具酶，用于協助單克隆抗體、融合蛋白藥物、生物類似藥等生物藥的表征分析及其相關翻譯后修飾，助力生物藥物的開發和質量控制。
蛋白測序肽圖分析
蛋白酶 | 酶切位點 | 特點 |
重組胰蛋白酶（質譜級） | 賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端 | 胰蛋白酶β型占比>80%； 比活≥6200 USP U/mg（相當于18600 BAEE U/mg） 強穩定性，凍融次數可達10次； 和進口品牌比，肽段漏切率更低、蛋白鑒定數更高； 批間差穩定，可提供相關法規支持文件。 |
重組賴氨酰內切酶(Lys-C) | 賴氨酸羧基側的酰胺、酯和肽鍵 | 可單獨使用，也可與胰蛋白酶聯用，鑒定更多的蛋白數以及磷酸化位點數目； 在4M尿素或者0.1%SDS存在的情況下仍可保持較高的酶活性。 |
Glu-C蛋白酶 | 谷氨酸或天冬氨酸殘基羧基端肽鍵 | 對于分析賴氨酸和精氨酸含量高的蛋白質，與胰蛋白酶聯用可顯著提高鑒定蛋白數目； 適用于分離和富集磷酸化肽段； |
重組人α-糜蛋白酶 | 酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸的羧基端肽鍵 | 特別適用于膜蛋白分析。 |
糖基化分析工具酶
糖苷酶 | 名稱 | 酶切位點 | 特點 |
唾液酸修飾 | 唾液酸酶(a2-3,6,8) | 糖蛋白和寡聚糖上通過a2-3,a2-6,a2-8鍵連接的唾液酸 | 可同時作用于N-羥乙酰神經氨酸和N-乙酰神經氨酸。 |
唾液酸酶(a2-3,6,8,9) | 糖蛋白和寡聚糖上通過a2-3,a2-6,a2-8和a2-9鍵連接的唾液酸 | 可同時作用于N-羥乙酰神經氨酸和N-乙酰神經氨酸； 可以忍受0.5%-1.0%的去污劑。 | |
N-糖基化修飾 | PNGase F | 天冬酰胺和最內側的GIcNAc之間的糖苷鍵 | 適用于抗體和糖蛋白的N-糖基完全去除； 可在變性與非變性條件下切割糖蛋白。 |
重組Endo H | N-糖蛋白中的高甘露糖和某些雜合型寡聚糖的殼二糖核心結構 | 適用于抗體或者其它糖蛋白的N-連接高甘露糖的完全去除。 存儲液中不含甘油。 | |
O-糖基化修飾 | O糖蛋白酶 | 粘蛋白型O-連接糖(無論是否唾液酸化)的絲氨酸或蘇氨酸殘基 | 適用于O-糖基化分析； 無需唾液酸酶預先處理。 |
抗體切割酶
IdeS Protease和IdeZ Protease是分別來源于化膿性鏈球菌 (Streptococcus pyogenes)和馬鏈球菌獸瘟亞種 (Streptococcus equi)的重組蛋白酶，該蛋白酶具有極高的底物特異性，能識別人等特定物種和特定類型的IgG，并在抗體鉸鏈區下方的特定位點進行酶切，使IgG水解為完整的F(ab')2片段和Fc片段。IdeS/Z酶作為工具酶應用于抗體類藥物的制備和結構表征分析，是用于表征治療性抗體、單克隆抗體、抗體偶聯藥物、Fc融合蛋白和抗體-藥物復合物的有價值的工具。
名稱 | 酶切位點 | 特點 |
IdeS蛋白酶 | 特異識別IgG,并在IgG下鉸鏈區的特定位點 | 可將lgG水解為完整的F(ab')2片段和Fc片段。 |
IdeZ蛋白酶 | 特異識別IgG,并在IgG下鉸鏈區的特定位點 | 可同時作用于N-羥乙酰神經氨酸和N-乙酰神經氨酸； 可以忍受0.5%-1.0%的去污劑。 |
標簽切除工具酶
名稱 | 酶切位點 | 特點 |
重組TEV蛋白酶（rTEV Protease） | 嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。 | 一種用來切除融合蛋白上標簽序列的常用工具酶，較EK、SUMO等蛋白酶的位點專一性更強，具有高活性和高特異性的特點。 |
Seebio蛋白工具酶匯總
蛋白測序肽圖分析 | ||
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
DCE0060U | 重組胰蛋白酶（質譜級，液體） | 25ug 100ug |
DCE0060T | 重組胰蛋白酶（質譜級，凍干） | 25ug 100ug |
EXK0369B | 重組賴氨酰內切酶 | 20ug |
AXJ4266C | 重組Glu-C蛋白酶，凍干 | 25ug 100ug |
AXJ4266B | 重組Glu-C蛋白酶 | 20ug 100ug |
DCL0640B | 重組人α-糜蛋白酶（凍干） | 20ug 50ug 100ug |
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>ECE0441E | PNGase F重組糖苷酶 | 20KU 40KU |
DCE0447C | 重組Endo H | 3KU 15KU |
DCE0448B | O糖蛋白酶 | 20U 100U |
DCE0457F | 唾液酸酶(α2-3,6,8) | 500U 2KU 10KU |
DCE0457E | 唾液酸酶(α2-3,6,8,9） | 2KU 10KU |
抗體切割酶 | ||
ECE0711A | IdeS蛋白酶 | 700U |
ECE0712A | IdeZ蛋白酶 | 1KU 2KU |
標簽切除工具酶 | ||
EBY3644A | Seebio?重組煙草蝕紋病毒蛋白酶（rTEV Protease） | 1KU 5KU 10KU |
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ACH0011F | 鹽酸胍 | 1kg |
DCH0005D | 二硫蘇糖醇（DTT） | 5g，100g，250g，500g |
AAU0091A | 碘乙酸 | 1g，5g |
ACC0030 | 三羥甲基氨基甲烷<結晶>(Tris base) | 100g，500g，1kg，25kg |
ACC0029 | 三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(TRIS-HCl) | 250g，500g，1kg，25kg |
