大家好，我是蛋白工具酶家族的新成員，我的名字叫“重組煙草蝕紋病毒蛋白酶（rTEV Protease）”，今天跟大家做個自我介紹：
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產(chǎn)品描述
重組TEV蛋白酶（rTEV Protease）經(jīng)過基因工程改造，在大腸桿菌中重組表達，帶His標簽(6X His tag)，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強的穩(wěn)定性和特異性。rTEVProtease是一種用來切除融合蛋白上標簽序列的常用工具酶，較EK、SUMO等蛋白酶的位點專一性更強，具有高活性和高特異性的特點。
品牌
| 貨號
| 包裝規(guī)格
| 比活
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Seebio?
| EBY3644A-1KU | 酶：1×1KU、Buffer：1×1.5ml | 1U/μL |
Seebio?
| EBY3644A-5KU | 酶：1×5KU、Buffer：2×1.5ml | 5U/μL |
Seebio?
| EBY3644A-10KU | 酶：2×5KU、Buffer：4×1.5ml | 5U/μL |
產(chǎn)品特點
嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。其序列專一性遠比凝血酶、因子xa、腸激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在廣泛pH（6.0-8.5）和溫度（4-30℃）內(nèi)進行酶切，使得反應條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動。rTEV酶在pH 7.0，30℃時可達到頂值活性。
產(chǎn)品應用
用于切除重組蛋白的融合標簽。rTEV酶的N端含有6×His，酶切結(jié)束后可以通過Ni2+親和層方便地去除rTEV，以達到純化目的蛋白的目的。
產(chǎn)品屬性
來源（Source）
| 大腸桿菌重組表達 |
外觀（Appearance）
| 無色透明液體 |
分子量
| 27.8kDa |
比活力（Specific Activity）
| 1U/μL1 5U/μL |
活性定義（Unit Definition）
| 在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個活性單位。 |
純化（Purification）
| 色譜純化 |
純度（Purity）
| ≥95%（by SDS-PAGE） |
產(chǎn)品組成
| 25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。 |
表1. 不同溫度下rTEV酶切活性
反應時間（h） | 不同溫度下剪切活性（%） | |||
4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
1 | 34 | 58 | 56 | 70 |
2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
應用舉例
組分
| 用量
|
融合蛋白 | 30μg |
rTEV Protease (1 U/μL) | 10μL |
rTEV buffer（10×） | 10μL |
ddH2O | 隨終體積變動 |
1.按如上表格配制反應體系。
2.混勻后在30℃條件下溫育，分別在1h、2h、4h、6h后取樣，置于單獨的EP管中。
3.向上述EP管中加入適量的 5×SDS Loading Buffer，-20℃保存至酶切完成。
4.取酶切樣品進行SDS-PAGE電泳分析，確定酶切效果，調(diào)整所需的合適酶量和反應時間。
5.如果目的蛋白在30℃不穩(wěn)定，可以于4℃反應過夜(16小時左右)。
2.混勻后在30℃條件下溫育，分別在1h、2h、4h、6h后取樣，置于單獨的EP管中。
3.向上述EP管中加入適量的 5×SDS Loading Buffer，-20℃保存至酶切完成。
4.取酶切樣品進行SDS-PAGE電泳分析，確定酶切效果，調(diào)整所需的合適酶量和反應時間。
5.如果目的蛋白在30℃不穩(wěn)定，可以于4℃反應過夜(16小時左右)。
運輸與保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期≥2年。
影響天然TEV酶活性的常見因素：
1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），PestatinA（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），以上這些蛋白酶抑制劑對rTEV的活性沒有影響；
2）Zn2+濃度（>5 mM）對rTEV活性有抑制作用；
3）與半胱氨酸反應的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。
常見問題
Q：該產(chǎn)品有何優(yōu)點？
A：重組型TEV 蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅有天然 TEV 酶活性，同時不會出現(xiàn)天然TEV酶的自我酶解問題，在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強的穩(wěn)定性和特異性。
A：重組型TEV 蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅有天然 TEV 酶活性，同時不會出現(xiàn)天然TEV酶的自我酶解問題，在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強的穩(wěn)定性和特異性。
Q：該產(chǎn)品可用于什么實驗？、
A：rTEV 是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性。
A：rTEV 是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性。
Q：該產(chǎn)品的最適酶切時間和溫度是多少？
A：16-30℃下反應 3-3.5h 效果佳。
A：16-30℃下反應 3-3.5h 效果佳。
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ECL0019H-100mg | 重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用 | 100mg |
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大家好，我是蛋白工具酶家族的新成員，我的名字叫“重組煙草蝕紋病毒蛋白酶（rTEV Protease）”，今天跟大家做個自我介紹：
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產(chǎn)品描述
重組TEV蛋白酶（rTEV Protease）經(jīng)過基因工程改造，在大腸桿菌中重組表達，帶His標簽(6X His tag)，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強的穩(wěn)定性和特異性。rTEVProtease是一種用來切除融合蛋白上標簽序列的常用工具酶，較EK、SUMO等蛋白酶的位點專一性更強，具有高活性和高特異性的特點。
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Seebio? | EBY3644A-1KU | 酶：1×1KU、Buffer：1×1.5ml | 1U/μL |
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產(chǎn)品應用
用于切除重組蛋白的融合標簽。rTEV酶的N端含有6×His，酶切結(jié)束后可以通過Ni2+親和層方便地去除rTEV，以達到純化目的蛋白的目的。
產(chǎn)品屬性
來源（Source）
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外觀（Appearance）
| 無色透明液體 |
分子量
| 27.8kDa |
比活力（Specific Activity）
| 1U/μL1 5U/μL |
活性定義（Unit Definition）
| 在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個活性單位。 |
純化（Purification）
| 色譜純化 |
純度（Purity）
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產(chǎn)品組成
| 25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。 |
表1. 不同溫度下rTEV酶切活性
反應時間（h） | 不同溫度下剪切活性（%） | |||
4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
1 | 34 | 58 | 56 | 70 |
2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
應用舉例
組分
| 用量
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融合蛋白 | 30μg |
rTEV Protease (1 U/μL) | 10μL |
rTEV buffer（10×） | 10μL |
ddH2O | 隨終體積變動 |
1.按如上表格配制反應體系。
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5.如果目的蛋白在30℃不穩(wěn)定，可以于4℃反應過夜(16小時左右)。
2.混勻后在30℃條件下溫育，分別在1h、2h、4h、6h后取樣，置于單獨的EP管中。
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5.如果目的蛋白在30℃不穩(wěn)定，可以于4℃反應過夜(16小時左右)。
運輸與保存
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影響天然TEV酶活性的常見因素：
1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），PestatinA（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），以上這些蛋白酶抑制劑對rTEV的活性沒有影響；
2）Zn2+濃度（>5 mM）對rTEV活性有抑制作用；
3）與半胱氨酸反應的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。
常見問題
Q：該產(chǎn)品有何優(yōu)點？
A：重組型TEV 蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅有天然 TEV 酶活性，同時不會出現(xiàn)天然TEV酶的自我酶解問題，在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強的穩(wěn)定性和特異性。
A：重組型TEV 蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅有天然 TEV 酶活性，同時不會出現(xiàn)天然TEV酶的自我酶解問題，在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強的穩(wěn)定性和特異性。
Q：該產(chǎn)品可用于什么實驗？、
A：rTEV 是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性。
A：rTEV 是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性。
Q：該產(chǎn)品的最適酶切時間和溫度是多少？
A：16-30℃下反應 3-3.5h 效果佳。
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