細(xì)胞結(jié)團(tuán)的原因
懸浮細(xì)胞可能由于各種原因相互附著并發(fā)生結(jié)團(tuán)。細(xì)胞結(jié)團(tuán)常見的原因是在細(xì)胞裂解之后，培養(yǎng)基中存在游離DNA和細(xì)胞碎片，DNA的粘性使細(xì)胞和其他碎片聚集成大的團(tuán)塊。
工藝培養(yǎng)過(guò)程中分析細(xì)胞結(jié)團(tuán)的原因來(lái)自兩方面：
1 動(dòng)物細(xì)胞本身可能存在固有的細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，如CHOS細(xì)胞；
2 動(dòng)物細(xì)胞在遇到不良的營(yíng)養(yǎng)條件和環(huán)境，也容易發(fā)生細(xì)胞聚集現(xiàn)象，以及培養(yǎng)基中Ca2+等離子的濃度也會(huì)影響細(xì)胞黏附。
聚團(tuán)后的影響
細(xì)胞微環(huán)境會(huì)發(fā)生惡化如：
- 氧氣供應(yīng)不足
- 代謝廢物積累
- 營(yíng)養(yǎng)物不足等
- 細(xì)胞死亡
如何抗細(xì)胞結(jié)團(tuán)？
抗細(xì)胞結(jié)團(tuán)常采用的物質(zhì)是多硫酸化合物，例如：肝素鈉、硫酸乙酰肝素、蘇拉明和硫酸葡聚糖。在多種多硫酸鹽化合物中，硫酸葡聚糖是在CHO細(xì)胞懸浮培養(yǎng)中應(yīng)用廣泛的抗結(jié)團(tuán)劑。
硫酸葡聚糖抗細(xì)胞結(jié)團(tuán)原理
葡聚糖硫酸鈉（Dextran sulfate sodium salt，DSS）是葡聚糖的聚陰離子衍生物，由葡聚糖和氯磺酸的酯化反應(yīng)形成，以鈉鹽形式提供，并通過(guò)添加少量磷酸鹽進(jìn)行穩(wěn)定。
不同分子量和濃度的硫酸葡聚糖的影響
2016年，科學(xué)家研究了硫酸葡聚糖的三種不同分子量（4000Da、15000Da和40000Da，其對(duì)應(yīng)的S比例分別為3-6%、17-19%和15-19%），以及不同濃度（0.1-1.0g/L）對(duì)兩種不同重組CHO細(xì)胞（CHO-K1細(xì)胞和DG44細(xì)胞）的生長(zhǎng)和單克隆抗體產(chǎn)量影響。并同時(shí)評(píng)估添加硫酸葡聚糖對(duì)單抗的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（如聚體、電荷變化和N-糖基化等)的影響。
前期研究發(fā)現(xiàn)，采用200000Da的硫酸葡聚糖，無(wú)論使用哪種濃度（0.1-1.0g/L），都會(huì)使活細(xì)胞密度和抗體濃度降低20-30％。說(shuō)明采用200000Da的硫酸葡聚糖對(duì)細(xì)胞來(lái)說(shuō)是有害。添加上述不同分子量不同濃度的硫酸葡聚糖對(duì)于CHOK1細(xì)胞，可以顯著維持培養(yǎng)后期細(xì)胞密度和活力，需要注意的是抗體表達(dá)并未對(duì)應(yīng)提高。
而對(duì)于DG44細(xì)胞添加硫酸葡聚糖，尤其是40,000Da分子量對(duì)于DG44細(xì)胞，細(xì)胞聚集會(huì)大大降低。并且顯著提高了抗體產(chǎn)物濃度。
另外通過(guò)硫酸葡聚糖對(duì)抗體質(zhì)量屬性的影響研究表明對(duì)于DG44細(xì)胞添加4000Da和15000 Da硫酸葡聚糖對(duì)單克隆抗體的電荷異構(gòu)體無(wú)影響(P<0.05)，只有添加40,000Da硫酸葡聚糖才顯著降低堿性電荷異構(gòu)體(P<0.05)；
添加硫酸葡聚糖對(duì)單克隆抗體的質(zhì)量屬性(聚體、電荷異構(gòu)體和N -糖基化)沒有負(fù)面影響，甚至可以對(duì)部分質(zhì)量屬性產(chǎn)生積極影響，如影響單克隆抗體的電荷異構(gòu)體，降低堿峰。
總之，對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)、抗體產(chǎn)量和質(zhì)量的影響取決于硫酸葡聚糖的分子量、濃度和CHO細(xì)胞系的選擇。因此，針對(duì)不同CHO細(xì)胞系，建議優(yōu)化硫酸葡聚糖的分子量和濃度，以發(fā)揮硫酸葡聚糖在單克隆抗體生產(chǎn)中的有益作用。
目前也有很多用硫酸葡聚糖鈉鹽,Mw 5,000 ，平均分子量約5 kD，可通過(guò)改變細(xì)胞表面的電荷，來(lái)促使單個(gè)細(xì)胞懸浮，防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)，支持細(xì)胞高密度培養(yǎng)，提高細(xì)胞活力。
Seebio?提供兩款高品質(zhì)細(xì)胞抗結(jié)團(tuán)用硫酸葡聚糖鈉Mw5000，Mw40000
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、 質(zhì)量?jī)?yōu)良：純度高，含硫量15~20%；
2、 穩(wěn)定性高：聚陰離子復(fù)合物，可溶于水，形成無(wú)色溶液，形似天然粘多糖；
3、 內(nèi)毒素低：低于5EU/g，對(duì)細(xì)胞傷害較小。
3、 性能突出: 能有效降低CHO、T細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)團(tuán)。
產(chǎn)品指標(biāo)
總硫含量 | 15~20% |
硫酸根含量 | ≤0.2% |
熱失重（105℃，2h） | ≤10.0% |
pH | 5.0~7.5 |
旋光度 | +75°~ +105° |
鐵離子 | ≤2.0% |
氯離子含量 | ≤1000ppm |
外觀 | 白色~淡黃色粉末 |
微生物限度 | 需氧菌＜105 cfu/g |
霉菌、酵母菌總數(shù) | ＜100 cfu/g |
內(nèi)毒素 | ＜5EU/g |
訂購(gòu)信息
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 5,000（DSS） | |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 5,000（DSS），低內(nèi)毒素 | |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 40,000（DSS），低內(nèi)毒素 |
Seebio葡聚糖硫酸鈉系列產(chǎn)品
各類不同用途葡聚糖硫酸鈉（DSS）
葡聚糖硫酸鈉 | 腸炎模型 | 分子生物學(xué) | 抗病毒 | 抗凝血?jiǎng)?/div> | 抗血脂劑 | 化妝品研發(fā) |
6000-8000 | √ | √ | √ | |||
8000（平均） | √ | √ | √ | |||
36000-50000 | √ | √ | √ | |||
400000-600000 | √ | √ | √ | |||
1400000（平均） | √ | √ |
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
硫酸葡聚糖鈉 2000（DSS） | |
硫酸葡聚糖鈉 3000（DSS） | |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 5,000（DSS） | |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 5,000（DSS），低內(nèi)毒素 | |
硫酸葡聚糖鈉 15000（DSS） | |
硫酸葡聚糖鈉 40,000（DSS） | |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 40,000（DSS），低內(nèi)毒素 | |
硫酸葡聚糖鈉 36,000~50,000（DSS） | |
硫酸葡聚糖鈉 500,000（DSS） |
西寶生物可以提供各種規(guī)格的硫酸葡聚糖鈉，平均分子量從2,000~500,000，歡迎致電400-021-8158.
細(xì)胞結(jié)團(tuán)的原因
懸浮細(xì)胞可能由于各種原因相互附著并發(fā)生結(jié)團(tuán)。細(xì)胞結(jié)團(tuán)常見的原因是在細(xì)胞裂解之后，培養(yǎng)基中存在游離DNA和細(xì)胞碎片，DNA的粘性使細(xì)胞和其他碎片聚集成大的團(tuán)塊。
工藝培養(yǎng)過(guò)程中分析細(xì)胞結(jié)團(tuán)的原因來(lái)自兩方面：
1 動(dòng)物細(xì)胞本身可能存在固有的細(xì)胞結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，如CHOS細(xì)胞；
2 動(dòng)物細(xì)胞在遇到不良的營(yíng)養(yǎng)條件和環(huán)境，也容易發(fā)生細(xì)胞聚集現(xiàn)象，以及培養(yǎng)基中Ca2+等離子的濃度也會(huì)影響細(xì)胞黏附。
聚團(tuán)后的影響
細(xì)胞微環(huán)境會(huì)發(fā)生惡化如：
- 氧氣供應(yīng)不足
- 代謝廢物積累
- 營(yíng)養(yǎng)物不足等
- 細(xì)胞死亡
如何抗細(xì)胞結(jié)團(tuán)？
抗細(xì)胞結(jié)團(tuán)常采用的物質(zhì)是多硫酸化合物，例如：肝素鈉、硫酸乙酰肝素、蘇拉明和硫酸葡聚糖。在多種多硫酸鹽化合物中，硫酸葡聚糖是在CHO細(xì)胞懸浮培養(yǎng)中應(yīng)用廣泛的抗結(jié)團(tuán)劑。
硫酸葡聚糖抗細(xì)胞結(jié)團(tuán)原理
葡聚糖硫酸鈉（Dextran sulfate sodium salt，DSS）是葡聚糖的聚陰離子衍生物，由葡聚糖和氯磺酸的酯化反應(yīng)形成，以鈉鹽形式提供，并通過(guò)添加少量磷酸鹽進(jìn)行穩(wěn)定。
不同分子量和濃度的硫酸葡聚糖的影響
2016年，科學(xué)家研究了硫酸葡聚糖的三種不同分子量（4000Da、15000Da和40000Da，其對(duì)應(yīng)的S比例分別為3-6%、17-19%和15-19%），以及不同濃度（0.1-1.0g/L）對(duì)兩種不同重組CHO細(xì)胞（CHO-K1細(xì)胞和DG44細(xì)胞）的生長(zhǎng)和單克隆抗體產(chǎn)量影響。并同時(shí)評(píng)估添加硫酸葡聚糖對(duì)單抗的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（如聚體、電荷變化和N-糖基化等)的影響。
前期研究發(fā)現(xiàn)，采用200000Da的硫酸葡聚糖，無(wú)論使用哪種濃度（0.1-1.0g/L），都會(huì)使活細(xì)胞密度和抗體濃度降低20-30％。說(shuō)明采用200000Da的硫酸葡聚糖對(duì)細(xì)胞來(lái)說(shuō)是有害。添加上述不同分子量不同濃度的硫酸葡聚糖對(duì)于CHOK1細(xì)胞，可以顯著維持培養(yǎng)后期細(xì)胞密度和活力，需要注意的是抗體表達(dá)并未對(duì)應(yīng)提高。
而對(duì)于DG44細(xì)胞添加硫酸葡聚糖，尤其是40,000Da分子量對(duì)于DG44細(xì)胞，細(xì)胞聚集會(huì)大大降低。并且顯著提高了抗體產(chǎn)物濃度。
另外通過(guò)硫酸葡聚糖對(duì)抗體質(zhì)量屬性的影響研究表明對(duì)于DG44細(xì)胞添加4000Da和15000 Da硫酸葡聚糖對(duì)單克隆抗體的電荷異構(gòu)體無(wú)影響(P<0.05)，只有添加40,000Da硫酸葡聚糖才顯著降低堿性電荷異構(gòu)體(P<0.05)；
添加硫酸葡聚糖對(duì)單克隆抗體的質(zhì)量屬性(聚體、電荷異構(gòu)體和N -糖基化)沒有負(fù)面影響，甚至可以對(duì)部分質(zhì)量屬性產(chǎn)生積極影響，如影響單克隆抗體的電荷異構(gòu)體，降低堿峰。
總之，對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)、抗體產(chǎn)量和質(zhì)量的影響取決于硫酸葡聚糖的分子量、濃度和CHO細(xì)胞系的選擇。因此，針對(duì)不同CHO細(xì)胞系，建議優(yōu)化硫酸葡聚糖的分子量和濃度，以發(fā)揮硫酸葡聚糖在單克隆抗體生產(chǎn)中的有益作用。
目前也有很多用硫酸葡聚糖鈉鹽,Mw 5,000 ，平均分子量約5 kD，可通過(guò)改變細(xì)胞表面的電荷，來(lái)促使單個(gè)細(xì)胞懸浮，防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)，支持細(xì)胞高密度培養(yǎng)，提高細(xì)胞活力。
Seebio?提供兩款高品質(zhì)細(xì)胞抗結(jié)團(tuán)用硫酸葡聚糖鈉Mw5000，Mw40000
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、 質(zhì)量?jī)?yōu)良：純度高，含硫量15~20%；
2、 穩(wěn)定性高：聚陰離子復(fù)合物，可溶于水，形成無(wú)色溶液，形似天然粘多糖；
3、 內(nèi)毒素低：低于5EU/g，對(duì)細(xì)胞傷害較小。
3、 性能突出: 能有效降低CHO、T細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)團(tuán)。
產(chǎn)品指標(biāo)
總硫含量 | 15~20% |
硫酸根含量 | ≤0.2% |
熱失重（105℃，2h） | ≤10.0% |
pH | 5.0~7.5 |
旋光度 | +75°~ +105° |
鐵離子 | ≤2.0% |
氯離子含量 | ≤1000ppm |
外觀 | 白色~淡黃色粉末 |
微生物限度 | 需氧菌＜105 cfu/g |
霉菌、酵母菌總數(shù) | ＜100 cfu/g |
內(nèi)毒素 | ＜5EU/g |
訂購(gòu)信息
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 5,000（DSS） | |
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各類不同用途葡聚糖硫酸鈉（DSS）
葡聚糖硫酸鈉 | 腸炎模型 | 分子生物學(xué) | 抗病毒 | 抗凝血?jiǎng)?/div> | 抗血脂劑 | 化妝品研發(fā) |
6000-8000 | √ | √ | √ | |||
8000（平均） | √ | √ | √ | |||
36000-50000 | √ | √ | √ | |||
400000-600000 | √ | √ | √ | |||
1400000（平均） | √ | √ |
產(chǎn)品信息
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硫酸葡聚糖鈉 3000（DSS） | |
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硫酸葡聚糖鈉 15000（DSS） | |
硫酸葡聚糖鈉 40,000（DSS） | |
Seebio? 硫酸葡聚糖鈉鹽 40,000（DSS），低內(nèi)毒素 | |
硫酸葡聚糖鈉 36,000~50,000（DSS） | |
硫酸葡聚糖鈉 500,000（DSS） |
西寶生物可以提供各種規(guī)格的硫酸葡聚糖鈉，平均分子量從2,000~500,000，歡迎致電400-021-8158.
