1.項(xiàng)目背景
摘自《人偏肺病毒感染診療方案（2023年版）》
人偏肺病毒感染是人體感染人偏肺病毒（humanmetapneumovirus，hMPV）后引起的一種急性呼吸道傳染病，全年散發(fā)，多發(fā)生于冬末及春初。hMPV感染大多表現(xiàn)為輕度自限性疾病，部分患者因出現(xiàn)毛細(xì)支氣管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重和支氣管哮喘急性發(fā)作等并發(fā)癥需要住院治療，免疫功能低下者可進(jìn)展為重癥肺炎，出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）或多器官功能不全等，甚至導(dǎo)致死亡。
1.1 病原學(xué)
hMPV屬于肺炎病毒科，偏肺病毒屬，為有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，平均直徑大約200nm。hMPV包括A和B兩個基因型，可分為A1、A2、B1、B2四個亞型，這些亞型常常同時流行，各亞型病毒傳播力和致病性未見明顯差別。
hMPV對熱敏感，60℃ 30分鐘可滅活；對乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑敏感；1%次氯酸鈉等含氯消毒劑、5%福爾馬林、2%戊二醛、1%碘伏等常用消毒劑可滅活病毒；對0.1%脫氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉（SDS）和曲拉通X-100（TritonX-100）等去污劑敏感。
1.2 臨床表現(xiàn)
潛伏期3-9天，多為3-6天。
多表現(xiàn)為上呼吸道感染癥狀，如發(fā)熱、咳嗽、鼻塞、流涕、聲音嘶啞等，約1周左右癥狀逐漸緩解。病情嚴(yán)重者可出現(xiàn)毛細(xì)支氣管炎、重癥肺炎和ARDS，COPD患者感染后病情可加重，支氣管哮喘患者可誘發(fā)急性發(fā)作。嚴(yán)重下呼吸道感染多見于幼兒、老年人等人群。肺移植、造血干細(xì)胞移植等免疫功能低下人群感染后癥狀更重，病死率也相對較高。
1.3 實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)檢查
a.病毒核酸檢測：采集呼吸道標(biāo)本（鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液等）采用熒光定量PCR、病毒基因測序等方法檢測hMPV核酸。核酸檢測的敏感性和特異性高。
b.病毒抗原檢測：酶免疫法、膠體金法和免疫熒光法等方法檢測呼吸道標(biāo)本中hMPV抗原，但病毒抗原檢測陰性不能除外診斷。
c.病毒培養(yǎng)分離：從呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)分離hMPV。
d.血清學(xué)檢測：檢測血清中特異性IgM抗體和IgG抗體，IgM抗體檢測敏感性和特異性較低。
2.測試方案及性能表現(xiàn)
針對人偏肺病毒（hMPV）抗原的檢測，西寶生物推出2種單克隆抗體和1種抗原，適合膠體金免疫層析、彩色乳膠免疫層析及熒光免疫層析平臺。具體性能如下。
（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行抗體交叉配對驗(yàn)證）。
2.1 膠體金免疫層析平臺
2.1.1 抗體配對組合1：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記膠體金+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜；
2.1.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL。
2.1.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時間15min-20min；
2.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在膠體金免疫層析平臺，采用此抗體配對組合1測試HMPV M抗原稀釋梯度均顯色，靈敏度可達(dá)0.05ng/mL。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此抗體配對在膠體金層析平臺測試性能良好。
膠體金層析平臺測試抗原梯度示意圖
2.1.5 特異性：分別測試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。
膠體金層析平臺測試特異性示意圖
2.2 彩色乳膠免疫層析平臺
2.2.1 抗體配對組合2：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記彩色乳膠+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜；
2.2.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.02ng/mL、0.01ng/mL、0.005ng/mL。
2.2.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時間15min-20min；
2.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在彩色乳膠免疫層析平臺，采用此抗體配對組合2測試HMPV M抗原稀釋梯度均顯色，靈敏度可達(dá)0.01ng/mL。表明此抗體配對在彩色乳膠免疫層析平臺測試性能良好。
彩色乳膠層析平臺測試抗原示意圖
2.2.5 特異性：分別測試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。
彩色乳膠層析平臺測試特異性示意圖
2.3 熒光免疫層析平臺
2.3.1抗體配對組合3：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記熒光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜；
2.3.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.01ng/mL。
2.3.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時間15min-20min；
2.3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在熒光免疫層析平臺，采用此抗體配對組合3測試HMPV M抗原稀釋梯度靈敏度可達(dá)0.01ng/mL（如表實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所示）。表明此抗體配對在熒光免疫層析平臺測試性能良好。此外，測試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。
表1 hMPV抗體配對組合測試數(shù)據(jù)
|
序號
|
HMPV M
濃度（ng/mL）
|
T
|
C
|
T/C
|
區(qū)分度
|
|
1
|
50
|
278348
|
33819
|
8.231
|
355%
|
|
2
|
10
|
229049
|
98808
|
2.318
|
483%
|
|
3
|
1
|
90519
|
188470
|
0.480
|
197%
|
|
4
|
0.5
|
51324
|
210947
|
0.243
|
207%
|
|
5
|
0.2
|
24432
|
207885
|
0.118
|
190%
|
|
6
|
0.1
|
13397
|
217067
|
0.062
|
200%
|
|
7
|
0.05
|
6019
|
195010
|
0.031
|
436%
|
|
8
|
0.01
|
1504
|
212230
|
0.007
|
|
|
9
|
0
|
0
|
213275
|
0
|
|
|
10
|
腺病毒抗原（10ug/mL）
|
470
|
264936
|
0.002
|
|
|
11
|
合胞病毒抗原（10ug/mL）
|
876
|
259908
|
0.003
|
|
|
12
|
2019-nCOV-SRFc3cho抗原（10ug/mL）
|
0
|
247336
|
0.000
|
|
|
13
|
2019-nCOV-SRHcho抗原（10ug/mL）
|
514
|
237353
|
0.002
|
測試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。
3.產(chǎn)品信息
|
產(chǎn)品名稱
|
貨號
|
推薦配對
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體
|
FKY0936C
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記膠體金+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜（膠體金層析配對組合1）
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記彩色乳膠+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜（彩色乳膠層析配對組合2）
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記熒光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜（熒光免疫層析配對組合3）
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體
|
FKY0936D
|
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）-膠體金濃縮液
|
DKY1338A
|
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）-彩色乳膠濃縮液
|
DKY1338B
|
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）-熒光微球濃縮液
|
DKY1338C
|
|
|
HMPV Matrix Protein
人偏肺病毒 (hMPV)M蛋白
|
EDD0812A
|
|
|
膠體金（40nm，1OD）
|
DXJ9917B-100ml
|
|
|
紅色羧基乳膠微球，400nm
|
DEG0809A-10ml
|
|
|
時間分辨熒光微球，羧基（200nm）
|
AEG0786B
|
|
1.項(xiàng)目背景
摘自《人偏肺病毒感染診療方案（2023年版）》
人偏肺病毒感染是人體感染人偏肺病毒（humanmetapneumovirus，hMPV）后引起的一種急性呼吸道傳染病，全年散發(fā)，多發(fā)生于冬末及春初。hMPV感染大多表現(xiàn)為輕度自限性疾病，部分患者因出現(xiàn)毛細(xì)支氣管炎、肺炎、慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重和支氣管哮喘急性發(fā)作等并發(fā)癥需要住院治療，免疫功能低下者可進(jìn)展為重癥肺炎，出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）或多器官功能不全等，甚至導(dǎo)致死亡。
1.1 病原學(xué)
hMPV屬于肺炎病毒科，偏肺病毒屬，為有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，平均直徑大約200nm。hMPV包括A和B兩個基因型，可分為A1、A2、B1、B2四個亞型，這些亞型常常同時流行，各亞型病毒傳播力和致病性未見明顯差別。
hMPV對熱敏感，60℃ 30分鐘可滅活；對乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑敏感；1%次氯酸鈉等含氯消毒劑、5%福爾馬林、2%戊二醛、1%碘伏等常用消毒劑可滅活病毒；對0.1%脫氧膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉（SDS）和曲拉通X-100（TritonX-100）等去污劑敏感。
1.2 臨床表現(xiàn)
潛伏期3-9天，多為3-6天。
多表現(xiàn)為上呼吸道感染癥狀，如發(fā)熱、咳嗽、鼻塞、流涕、聲音嘶啞等，約1周左右癥狀逐漸緩解。病情嚴(yán)重者可出現(xiàn)毛細(xì)支氣管炎、重癥肺炎和ARDS，COPD患者感染后病情可加重，支氣管哮喘患者可誘發(fā)急性發(fā)作。嚴(yán)重下呼吸道感染多見于幼兒、老年人等人群。肺移植、造血干細(xì)胞移植等免疫功能低下人群感染后癥狀更重，病死率也相對較高。
1.3 實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)檢查
a.病毒核酸檢測：采集呼吸道標(biāo)本（鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液等）采用熒光定量PCR、病毒基因測序等方法檢測hMPV核酸。核酸檢測的敏感性和特異性高。
b.病毒抗原檢測：酶免疫法、膠體金法和免疫熒光法等方法檢測呼吸道標(biāo)本中hMPV抗原，但病毒抗原檢測陰性不能除外診斷。
c.病毒培養(yǎng)分離：從呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)分離hMPV。
d.血清學(xué)檢測：檢測血清中特異性IgM抗體和IgG抗體，IgM抗體檢測敏感性和特異性較低。
2.測試方案及性能表現(xiàn)
針對人偏肺病毒（hMPV）抗原的檢測，西寶生物推出2種單克隆抗體和1種抗原，適合膠體金免疫層析、彩色乳膠免疫層析及熒光免疫層析平臺。具體性能如下。
（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行抗體交叉配對驗(yàn)證）。
2.1 膠體金免疫層析平臺
2.1.1 抗體配對組合1：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記膠體金+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜；
2.1.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL。
2.1.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時間15min-20min；
2.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在膠體金免疫層析平臺，采用此抗體配對組合1測試HMPV M抗原稀釋梯度均顯色，靈敏度可達(dá)0.05ng/mL。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明此抗體配對在膠體金層析平臺測試性能良好。
膠體金層析平臺測試抗原梯度示意圖
2.1.5 特異性：分別測試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。
膠體金層析平臺測試特異性示意圖
2.2 彩色乳膠免疫層析平臺
2.2.1 抗體配對組合2：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記彩色乳膠+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜；
2.2.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.02ng/mL、0.01ng/mL、0.005ng/mL。
2.2.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時間15min-20min；
2.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在彩色乳膠免疫層析平臺，采用此抗體配對組合2測試HMPV M抗原稀釋梯度均顯色，靈敏度可達(dá)0.01ng/mL。表明此抗體配對在彩色乳膠免疫層析平臺測試性能良好。
彩色乳膠層析平臺測試抗原示意圖
2.2.5 特異性：分別測試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。
彩色乳膠層析平臺測試特異性示意圖
2.3 熒光免疫層析平臺
2.3.1抗體配對組合3：人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記熒光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜；
2.3.2 人偏肺病毒（HMPV）M抗原（貨號：EDD0812A）用合適的稀釋液按照理論濃度依次稀釋到50ng/mL、10ng/mL、1ng/mL、0.5ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.05ng/mL、0.01ng/mL。
2.3.3 反應(yīng)模式：80uL樣品直接上樣，反應(yīng)時間15min-20min；
2.3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在熒光免疫層析平臺，采用此抗體配對組合3測試HMPV M抗原稀釋梯度靈敏度可達(dá)0.01ng/mL（如表實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所示）。表明此抗體配對在熒光免疫層析平臺測試性能良好。此外，測試濃度為10ug/mL的腺病毒抗原、合胞病毒抗原、2019-nCOV-SRFc3cho抗原、2019-nCOV-SRHcho抗原，結(jié)果均為陰性，表明特異性良好。
表1 hMPV抗體配對組合測試數(shù)據(jù)
|
序號
|
HMPV M
濃度（ng/mL）
|
T
|
C
|
T/C
|
區(qū)分度
|
|
1
|
50
|
278348
|
33819
|
8.231
|
355%
|
|
2
|
10
|
229049
|
98808
|
2.318
|
483%
|
|
3
|
1
|
90519
|
188470
|
0.480
|
197%
|
|
4
|
0.5
|
51324
|
210947
|
0.243
|
207%
|
|
5
|
0.2
|
24432
|
207885
|
0.118
|
190%
|
|
6
|
0.1
|
13397
|
217067
|
0.062
|
200%
|
|
7
|
0.05
|
6019
|
195010
|
0.031
|
436%
|
|
8
|
0.01
|
1504
|
212230
|
0.007
|
|
|
9
|
0
|
0
|
213275
|
0
|
|
|
10
|
腺病毒抗原（10ug/mL）
|
470
|
264936
|
0.002
|
|
|
11
|
合胞病毒抗原（10ug/mL）
|
876
|
259908
|
0.003
|
|
|
12
|
2019-nCOV-SRFc3cho抗原（10ug/mL）
|
0
|
247336
|
0.000
|
|
|
13
|
2019-nCOV-SRHcho抗原（10ug/mL）
|
514
|
237353
|
0.002
|
測試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。
3.產(chǎn)品信息
|
產(chǎn)品名稱
|
貨號
|
推薦配對
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體
|
FKY0936C
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記膠體金+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜（膠體金層析配對組合1）
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記彩色乳膠+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜（彩色乳膠層析配對組合2）
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）標(biāo)記熒光微球+人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936C）劃膜（熒光免疫層析配對組合3）
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體
|
FKY0936D
|
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）-膠體金濃縮液
|
DKY1338A
|
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）-彩色乳膠濃縮液
|
DKY1338B
|
|
|
人偏肺病毒 (hMPV)抗體（貨號：FKY0936D）-熒光微球濃縮液
|
DKY1338C
|
|
|
HMPV Matrix Protein
人偏肺病毒 (hMPV)M蛋白
|
EDD0812A
|
|
|
膠體金（40nm，1OD）
|
DXJ9917B-100ml
|
|
|
紅色羧基乳膠微球，400nm
|
DEG0809A-10ml
|
|
|
時間分辨熒光微球，羧基（200nm）
|
AEG0786B
|
|
